Chemical composition and biological activities of essential oil from flowers of Psidium guajava (Myrtaceae) / Composição química e atividades biológicas do óleo essencial das flores de Psidium guajava (Myrtaceae)

Abstract Xylella fastidiosa is a plant-pathogenic bacterium that lives inside host xylem vessels, where it forms biofilm which is believed to be responsible for disrupting the passage of water and nutrients. Pectobacterium carotovorum is a Gram-negative plant-specific bacterium that causes not only soft rot in various plant hosts, but also blackleg in potato by plant cell wall degradation. Chagas disease, which is caused by Trypanosoma cruzi, has been commonly treated with nifurtimox and benzonidazole, two drugs that cause several side effects. As a result, the use of natural products for treating bacterial and neglected diseases has increased in recent years and plants have become a promising alternative to developing new medicines. Therefore, this study aimed to determine, for the first time, the chemical composition of essential oil from Psidium guajava flowers (PG-EO) and to evaluate its in vitro anti-Xylella fastidiosa, anti-Pectobacterium carotovorum, anti-Trypanosoma cruzi and cytotoxic activities. PG-EO was obtained by hydrodistillation in a Clevenger apparatus while its chemical composition was determined by gas chromatography-flame ionization detection (GC-FID) and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Major compounds identified in PG-EO were α-cadinol (37.8%), β-caryophyllene (12.2%), nerolidol (9.1%), α-selinene (8.8%), β-selinene (7.4%) and caryophyllene oxide (7.2%). Results showed that the PG-EO had strong trypanocidal activity against the trypomastigote forms of Trypanosoma cruzi (IC50 = 14.6 μg/mL), promising antibacterial activity against X. fastidiosa (MIC = 12.5 μg/mL) and P. carotovorum (MIC = 62.5 μg/mL), and moderate cytotoxicity against LLCMK2 adherent epithelial cells in the concentration range (CC50 = 250.5 μg/mL). In short, the PG-EO can be considered a new source of bioactive compounds for the development of pesticides and trypanocide drugs.

Resumo Xylella fastidiosa é uma bactéria patogênica que vive dentro dos vasos do xilema hospedeiro, onde forma um biofilme responsável por interromper a passagem de água e nutrientes. Pectobacterium carotovorum é uma bactéria Gram-negativa que causa não só podridão macia em várias plantas hospedeiras, mas também canela-preta na batata por degradação da parede celular da planta. A doença de Chagas, causada pelo Trypanosoma cruzi, é comumente tratada com nifurtimox e benzonidazol, duas drogas que causam vários efeitos colaterais. Como resultado, o uso de produtos naturais para o tratamento de doenças bacterianas e negligenciadas aumentou nos últimos anos e as plantas continuam sendo uma alternativa promissora para o desenvolvimento de novos medicamentos. Portanto, este estudo teve como objetivo determinar, pela primeira vez, a composição química do óleo essencial de flores de Psidium guajava (PG-EO) e avaliar suas propriedades anti-Xylella fastidiosa, anti-Pectobacterium carotovorum, anti-Trypanosoma cruzi e citotóxica in vitro. PG-EO foi obtido por hidrodestilação em um aparelho Clevenger, enquanto sua composição química foi determinada por cromatografia em fase gasosa com detecção por ionização por chama (CG-DIC) e por cromatografia em fase gasosa acoplada à espectrometria de massa (CG-EM). Os principais compostos identificados no PG-EO foram α-cadinol (37,8%), β-cariofileno (12,2%), nerolidol (9,1%), α-selineno (8,8%), β-selineno (7,4%) e óxido de cariofileno (7,2%). Os resultados mostraram que o PG-EO apresentou forte atividade tripanocida contra as formas tripomastigotas de T. cruzi (CI50 = 14,6 μg/mL), promissora atividade antibacteriana contra X. fastidiosa (MIC = 12,5 μg/mL) e P. carotovorum (MIC = 62,5 μg/mL) e citotoxicidade moderada contra células epiteliais aderentes (LLCMK2) na faixa de concentração (CC50 = 250,5 μg/mL). Em suma, o PG-EO pode ser considerado uma nova fonte de compostos bioativos para o desenvolvimento de pesticidas e drogas tripanocidas.

Effect of protein supplementation on yield and milk composition of F1 Holstein x Zebu cows kept in deferred pasture of brachiaria grass / [Efeito da suplementação de proteína na produção e na composição do leite de F1 vacas Holandês x Zebu mantidas em pasto diferido de capim-braquiária]

The objective of this study was to evaluate different supplementation strategies concentrated to F1 Holstein x Zebu lactating cows managed in deferred signal grass pasture on the yield and composition of milk and body weight gain. Thirty six F1 Holstein x Zebu cows with an average lactation period of 267 ± 10 days, mean body weight of 548 ± 19kg were used following a completely randomized design in a 4 x 5 factorial scheme, being four feeding strategies and five days under evaluation. The treatments consisted of four nutritional strategies: deferred pasture as a source of roughage without supplementation (PDSS); deferred pasture as a source of roughage with protein supplement offer (PDCS); deferred pasture supplemented with 15 kilos of corn silage (natural base) + 1,200 grams of protein supplement (PDSP) and corn silage (ad libitum) + 700 grams of protein supplement (SMP). There was no interaction (P> 0.05) between the nutritional plans and days under evaluation for any of the variables. It was found that cows fed SMP showed milk production 26.06% higher than the other nutritional plans (mean of 11.46kg/day). F1 Holstein/Zebu cows handled in deferred pasture in a traditional way supplemented with protein maintains milk yield.(AU)

Objetivou-se avaliar diferentes planos nutricionais para vacas F1 Holandês/Zebu mantidas em pasto diferido de capim-braquiária sobre a produção e a composição do leite e no ganho em peso corporal. Foram utilizadas 36 vacas F1 Holandês/Zebu com período médio de lactação de 267 ± 10 dias, peso corporal médio de 548 ± 19kg, seguindo o delineamento inteiramente ao acaso, em esquema fatorial 4 x 5, sendo quatro estratégias de alimentação e cinco dias em avaliação. Os tratamentos consistiram de quatro planos nutricionais: pasto diferida como fonte de forragem sem suplementação (PDSS); pastagem diferida como fonte de forragem com oferta de suplemento de proteico (PDCS); pasto diferido suplementado com 15 quilos de silagem de milho (base natural) + 1.200 gramas de suplemento proteico (PDSP) e silagem de milho (ad libitum) + 700 gramas de suplemento de proteína (SMP). Verificou-se que as vacas alimentadas com SMP apresentaram produção de leite 26,06% superior aos demais planos nutricionais (média de 11,46kg/dia). Vacas F1 Holandês/Zebu tratadas em pastagem diferida de maneira tradicional, suplementada com proteína, mantêm o rendimento de leite.(AU)

Effects of short-term feed restriction on the physiological parameters and metabolites of F1 Holstein x Zebu cows in different stages of lactation / [Efeitos da restrição alimentar de curto prazo sobre os parâmetros fisiológicos e metabólicos de vacas F1 Holstein x Zebu em diferentes estágios da lactação]

This study aimed to evaluate the effects of different nutritional plans on the productive, physiological and metabolic parameters of F1 ½ Holstein x ½ Zebu cows in different stages of lactation. Sixty lactating cows were allotted to a completely randomized 5 x 3 factorial design with five feed allowances and three lactation periods. The dry matter intake, milk yield and heart rate were reduced by 5.69kg, 2.41kg and 10.36 beats/min (morning) and 10.25 beats/min (afternoon) for each 1% feed restriction, respectively. There was no difference in the concentration of glucose, total protein, albumin, cholesterol and non-esterified fatty acids for cows subjected to different feed allowances, with means of 95.25, 7.98, 2.95, 121.68 and 0.45mg/dL, respectively. Feed restriction of up to 2.50% BW is a cost reduction strategy that does not alter milk yield, regardless of the stage of lactation.(AU)

Objetivou-se avaliar os efeitos de diferentes planos nutricionais sobre as características produtivas, fisiológicas e metabólicas de vacas F1 ½ Holandês x ½ Zebu. Foram utilizadas 60 vacas em lactação, seguindo-se o delineamento inteiramente ao acaso, em esquema fatorial 5 x 3, com cinco níveis de oferta de dieta e três períodos de lactação. À medida que se aumentou 1% na restrição da oferta da dieta, houve redução linear de 5,69kg no consumo de matéria seca pelos animais, 2,41kg na produção de leite, bem como de 10,36bat/min (manhã) e 10,25 bat/min (tarde) na frequência cardíaca dos animais. Não houve diferença para a concentração de glicose, proteínas totais, albumina, colesterol e NEFA com a restrição na oferta da dieta dos animais, sendo a média de 95,25, 7,98, 2,95, 121,68 e 0,45mg/dL, respectivamente. Recomenda-se a restrição de até 2,50% de peso corporal como estratégia de redução dos custos em todos os estágios em lactação, visando não alterar, economicamente, a produção de leite.(AU)

Caracterização fenotípica de vacas F1 Holandês x Zebu de diferentes bases maternas / [Phenotypic characterization of Holsteins x Zebu F1 cows from different maternal bases]

Caracterizaram-se fêmeas F1 Holandês x Zebu de diferentes bases maternas quanto às pelagens, despigmentações e características morfométricas. Foram utilizadas 266 fêmeas F1, progênies do cruzamento de 26 touros da raça Holandesa com fêmeas de composição genética zebuínas: Gir, Nelore, Guzonel, Nelogir. Foram aplicadas análise de distribuição de frequência para características qualitativas e medidas de dispersão e tendência central para características morfométricas, e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Acima de 60,0% dos animais foram de pelagem preta. As vacas que tiveram origem na raça Gir apresentaram comprimento de cabeça 2,8cm maior (P<0,05) que as fêmeas da raça Nelore. O comprimento da orelha variou (P<0,05) conforme a base materna utilizada. As vacas com genes da raça Nelore são 5,0cm mais altas (P<0,05). O perímetro torácico foi a característica morfométrica que teve correlação fenotípica de elevada magnitude com o peso, acima de 0,70, para as fêmeas das bases maternas Gir, Nelore e Nelogir. A pelagem não é indicativa da base materna utilizada. As vacas F1 de base materna Gir tiveram estrutura corporal menor que as fêmeas que portam genes da raça Nelore.(AU)

F1 Holstein x Zebu females from different maternal bases were characterized regarding coat, depigmentation and morphometric characteristics. A total of 266 F1 female progenies from the crossbreeding of 26 Holstein bulls with females of Zebu genetic composition were used: Gir, Nellore, Guzonel, Nellogir. Frequency distribution analysis was applied for qualitative characteristics and dispersion measures and central tendency for morphometric characteristics, and means were compared by Tukey test at 5% probability. Over 60.0% of the animals had a black coat. The cows that originated from the Gir breed had a head length of 2.8cm (P<0.05) higher than the Nellore females. Ear length varied (P<0.05) according to the maternal base used. Cows with Nelore genes were 5.0cm taller (P<0.05). The thoracic perimeter was the morphometric characteristic that had a high magnitude phenotypic correlation with weight, above 0.70, for the females of the Gir, Nellore and Nellogir maternal bases. The coat is not indicative of the maternal base used. F1 Gir-based cows had a smaller body structure than females with Nellore genes.(AU)

Análise termográfica aplicada na produção de calor corporal de vacas F1 HxZ manejadas em diferentes microclimas / Thermographic analysis applied to body heat production of F1 HxZ cows managed in different microclimates

Avaliou-se a produção de calor corporal de vacas F1 HxZ manejadas em diferentes microclimas. Foram avaliadas 48 vacas, divididas em três grupos, manejadas em pastos e microclimas diferentes. Cada grupo foi subdividido em três grupos de suplementação fornecida durante a ordenha. Os registros termográficos dos flancos direito e esquerdo ocorreram com os animais a pasto. As temperaturas do olho e retal foram mensuradas após a ordenha. O ITGU caracterizou sinal de perigo para o microclima 1 no período da tarde (81,7) e para o microclima 2 nos turnos da manhã e da tarde (81,6 e 83,8, respectivamente). No microclima 2, houve diferença da temperatura do flanco direito para animais do grupo 2 em relação aos animais do grupo 3. A temperatura do flanco esquerdo foi superior para os animais do grupo 1. O microclima 1 foi caracterizado de conforto térmico, e o 2 de desconforto nos períodos da manhã e da tarde. A suplementação não influenciou na produção de calor dos animais. As médias da temperatura retal e do olho não diferiram entre os grupos, e a correlação apresentou valores baixos e moderados para os microclimas 1 e 2, respectivamente. A oferta de diferentes fontes de suplementação não interfere na produção de calor corporal de vacas F1 HxZ, mesmo quando fornecido em ambiente climático em que o ITGU é próximo a 84.(AU)

Body heat production of F1 HxZ cows managed in different microclimates was evaluated. We evaluated 48 cows, divided into two groups, managed in different pastures and microclimates. Each group was subdivided into three groups of supplementation provided during milking. The thermographic records of the right and left flanks occurred with the animals on the grass. Eye and rectal temperatures were measured after milking. The BGT had a danger signal for microclimate 1 in the afternoon (81.7) and microclimate 2 in the morning and afternoon shifts (81.6 and 83.8, respectively). In microclimate 2, there was difference in the temperature of the right flank for animals in group 2 in relation to the animals in group 3. The temperature of the left flank was higher for the animals in the group 1. Microclimate 1 was characterized by thermal comfort and 2 was discomfort in the morning and afternoon. Supplementation did not influence the heat production of the animals. Rectal and eye mean averages did not differ between groups and the correlation presented low and moderate values for microclimate 1 and 2, respectively. The supply of different sources of supplementation does not interfere with the production and body heat of F1 HxZ cows even when supplied in a climatic environment in which the BGT is close to 84.(AU)

Antibacterial and antiproliferative activities of the fresh leaf essential oil of Psidium guajava L. (Myrtaceae) / Atividades antibacteriana e antiproliferativa do óleo essencial das folhas frescas de Psidium guajava L. (Myrtaceae)

Abstract This study evaluated the antibacterial and antiproliferative activities of the essential oil of Psidium guajava leaves (PG-EO), traditionally used in folk medicine. The essential oil was obtained from fresh leaves by hydrodistillation, using a modified Clevenger apparatus. The major PG-EO chemical constituents were identified by GC-MS and GC-FID as being β-caryophyllene (16.1%), α-humulene (11.9%), aromadendrene oxide (14.7%), δ-selinene (13.6%), and selin-11-en-4α-ol (12.5%). The antibacterial activity of the essential oil of P. guajava leaves was determined in terms of its minimum inhibitory concentrations (MIC) using the broth microdilution method in 96-well microplates. PG-EO had moderate activity against Streptococcus mutans (MIC = 200 µg/mL), S. mitis (MIC = 200 µg/mL), S. sanguinis (MIC = 400 µg/mL), S. sobrinus (MIC = 100 µg/mL), and S. salivarius (MIC = 200 µg/mL). The antiproliferative activity was evaluated against different tumor cell lines: breast adenocarcinoma (MCF-7), human cervical adenocarcinoma (HeLa), and human gliobastoma (M059J). A normal human cell line (GM07492A, lung fibroblasts) was included. The antiproliferative activity was evaluated using the XTT assay and the results were expressed as IC50. The essential oil showed significantly lower IC50 values against MCF-7 and M059J lines than that obtained for the normal line, showing selectivity. Our results suggest that the essential oil of Psidium guajava L. has promising biological activities and can be considered a new source of bioactive compounds.

Resumo Este estudo avaliou as atividades antibacteriana e antiproliferativa do óleo essencial das folhas frescas de Psidium guajava (PG-OE), tradicionalmente utilizadas na medicina popular. O óleo essencial foi obtido por hidrodestilação das folhas frescas, utilizando aparelho do tipo Clevenger. Os principais constituintes químicos de PG-OE identificados por CG-EM e CG-DIC foram: β-cariofileno (16,1%), α-humuleno (11,9%), óxido de aromadendreno (14,7%), δ-selineno (13,6%) e selin-11-en-4α-ol (12,5%). A atividade antibacteriana do óleo essencial das folhas de P. guajava foi determinada em termo de sua concentração inibitória mínima (CIM) utilizando o método de microdiluição de caldo em microplacas de 96 poços. PG-OE apresentou moderada atividade contra Streptococcus mutans (CIM = 200 μg/mL), S. mitis (CIM = 200 μg/mL), S. sanguinis (CIM = 400 μg/mL), S. sobrinus (CIM = 100 μg/mL) e S. salivarius (CIM = 200 μg/mL). A atividade antiproliferativa foi avaliada frente a diferentes linhagens de células tumorais como: adenocarcinoma de mama (MCF-7), adenocarcinoma cervical humano (HeLa) e gliobastoma humano (M059J). Foi incluída uma linhagem celular humana normal (GM07492A, fibroblastos pulmonares). A atividade antiproliferativa foi avaliada utilizando o ensaio XTT e os resultados foram expressos como CI50. As linhagens MCF-7 e M059J mostraram valores significativamente mais baixos de CI50 do que os obtidos para a linhagem normal, mostrando seletividade. Nossos resultados sugerem que o óleo essencial das folhas frescas de Psidium guajava L. possui atividades biológicas promissoras e pode ser considerado como uma nova fonte de compostos bioativos.

Substituition of urea for soybean meal and forced intake of minerals on the performance of growing crossbred calves / Substituição da ureia por farelo de soja e consumo forçado de minerais no desempenho de bezerros em crescimento

Forty eight crossbred calves, 24 males and 24 females, with weight and age of 203.6±3.7kg and 11.8±1.0 months were allotted to the following treatments: MT- mineral salt ad libitum and sugar cane mixed with 10g kg-1 mixture of urea and ammonium sulfate in a 9:1 proportion; MA - sugar cane mixed with 16g kg-1 of a concentrate of urea (550g kg-1), ammonium sulfate (60g kg-1) and minerals (390g kg-1); SU - sugar cane mixed with 50g kg-1 of a concentrate of soybean meal (830g kg-1), urea (52g kg-1) and minerals (118g kg-1) and MC - corn silage mixed with 10g kg-1 of a concentrate of urea (500g kg-1), ammonium sulfate (50g kg-1) and minerals (450g kg-1). Minerals mixed with sugar cane (MA) resulted in greater weight gain (0.258 x 0.188kg d-1) for similar intakes of DM (3.29 x 3.30kg d-1). Substitution of part of urea nitrogen in the MA by soybean meal (SU) resulted in greater ADG (0.538 x 0.258kg d-1), due to higher sugar cane intake (4.10 x 3.13kg d-1). ADG of calves receiving corn silage was greater (0.406 x 0.258kg d-1) than for calves receiving sugar cane.(AU)

Quarenta e oito bezerros cruzados, com peso vivo de 203,6±3,7kg e idade de 11,8±1,0 meses, sendo 24 machos e 24 fêmeas, foram distribuídos nos tratamentos: MT - sal mineral à vontade e cana-de-açúcar adicionada de 10g kg -1 de uma mistura de ureia e sulfato de amônio na proporção de 9:1; MA - cana-de-açúcar adicionada de 16g kg -1 de uma mistura de ureia (55%), sulfato de amônio (6%) e minerais (39%); SU - cana-de-açúcar adicionada de 50g kg -1 de uma mistura de farelo de soja (83%), ureia (5,2%) e minerais (11,8%); e MC - silagem de milho adicionada de 10g kg -1 de uma mistura de ureia (50%), sulfato de amônio (5%) e minerais (45%). Minerais misturados no volumoso resultaram em maior ganho de peso (0, 258 x 0,188kg/dia) com consumos semelhantes de matéria seca (3,29 x 3,30kg/dia). Substituição de parte do nitrogênio da ureia no MA pelo do farelo de soja resultou em aumento do ganho de peso (0,258 x 0,538kg/dia) e no consumo de cana (3,13 x 4,10kg/dia). Ganho de peso dos bezerros que receberam silagem de milho foi superior ao dos bezerros que receberam o MA (0,406 x 0,258kg/dia), devido ao maior consumo de silagem (4,71 x 3,13kg/dia).(AU)

Suplementação proteica de vacas leiteiras mantidas em pastagem de Tifton 85 durante o período de seca / Protein supplementation of dairy cows grazing Tifton 85 during the dry season

Concentrados com alta proteína bruta e minerais e com menor concentração de energia poderiam ser utilizados em menores quantidades no balanceamento de dietas com volumosos tropicais. Assim, objetivou-se avaliar o consumo de matéria seca, a resposta produtiva e econômica de vacas da raça Girolando mantidas em pastagem de Tifton 85 durante o período de seca, as quais receberam diferentes concentrações de suplementação proteica. Foram utilizadas 12 vacas da raça Girolando em lactação, com produção de leite média inicial de 18,00±1,615kg/dia. Os animais foram distribuídos em três quadrados latinos (4x4), constituídos de quatro tratamentos e quatro períodos experimentais, com duração de 15 dias cada. Os tratamentos consistiram de uma dieta controle, apenas sal mineral e três níveis de suplementação proteica com 40; 50 e 60% de proteína bruta (PB) sendo fornecidas nas quantidades de 2,5kg/animal/dia. Observou-se que os fornecimentos de suplementos proteicos proporcionaram um efeito substitutivo da forragem em relação à suplementação mineral. O uso de suplementação concentrada com teor de 40% de proteína bruta foi mais eficiente em termos produtivos, econômicos e de produção de proteína bruta no leite.(AU)

Concentrates with high crude protein and minerals and lower energy concentration could be used in smaller quantities in balancing diets with tropical bulk. The objective of this study was to evaluate the dry matter intake, the productive and economical response of Girolando cows kept in Tifton 85 pasture during dry season receiving different concentrations of protein supplementation. Twelve lactating Girolando cows with initial mean milk yield of 18.00±1.615kg/day were used. The animals were distributed in three Latin squares (4x4), consisting of four treatments and four experimental periods, each lasting 15 days. The treatments were composed of control diet with only mineral salt, and three levels of protein supplementation with 40, 50, and 60% crude protein (CP) being supplied in the amounts of 2.5kg/animal/day. It was found that the protein supplement supplies provided a substitutive effect of forage relative to mineral supplementation. The use of concentrated supplementation with 40% crude protein content was more efficient in terms of production, production of crude protein in milk and economically.(AU)

Respostas produtivas, marginais e econômicas de vacas Girolando sob pastejo de Tifton 85 recebendo diferentes concentrados / Productive, marginal and economic responses of Girolando cows under grazing of Tifton 85 receiving different concentrates

A energia é considerada o nutriente mais limitante para produção de leite de vacas em pastagens, mas será que a suplementação deve ser energética? Assim, objetivou-se avaliar a resposta produtiva, marginal e econômica de vacas Girolandas mantidas em pastagem de Tifton 85 durante o período das águas, as quais receberam diferentes tipos de suplementação. O primeiro tratamento foi a suplementação mineral ad libitum; o segundo tratamento, o fornecimento de 1,0kg/dia de suplementação proteica; o terceiro e quarto tratamentos, o fornecimento de 2,0kg/dia de suplementação proteico-energética e 4,0kg/dia de suplementação energética, respectivamente. Foram utilizadas 12 vacas com produção de leite média de 15,0±1,99kg/dia. Os dados foram avaliados como três quadrados latinos 4 x 4 simultâneos ao nível de 5% de significância. O consumo de matéria seca de forragem não foi influenciado pelas suplementações (P>0,05). A maior produção de leite (P<0,05) foi observada com a suplementação energética, em média 14,73kg/dia, não diferente da produção com a suplementação proteico-energética, média de 13,84kg de leite/dia. Observaram-se respostas produtivas marginais de 1,03; 0,84 e 0,44kg de leite/kg de concentrado, para suplemento proteico, proteico-energético e energético, respectivamente, bem como saldo financeiro positivo para as suplementações proteica e proteico-energética em relação à suplementação mineral. A suplementação proteico-energética mostrou-se a mais eficiente.(AU)

Energy is considered the most limiting nutrient for the production of milk cows in pastures, but will that supplementation must be energy? The objective was to evaluate the productive, marginal and economic response of Girolando cows kept in Tifton 85 pasture during rain period receiving different types of supplementation. One treatment was mineral supplementation ad libitum, a second treatment providing 1.0kg/day of protein supplementation, and a third and fourth treatments providing 2.0kg/day of protein-energetic supplementation and 4.0kg/day of energy supplementation, respectively. Twelve cows were used with average milk production 15.0±1.99kg/day. The data were evaluated as three Latin squares 4 x 4 simultaneous to the 5% level of significance. The dry matter intake of forage not influenced by supplementation (P> 0.05). The higher milk production was observed with energetic supplementation on average 14.73kg of milk/day, no different of production obtained from protein-energy supplementation, average of 13.84kg of milk/day. Marginal productive response was observed, with responses of 1.03; 0.84 and 0.44kg milk/kg concentrate for proteic supplement, proteic-energetic, and energetic, respectively. Positive financial balance was found for protein and protein-energy supplements in relation to mineral supplementation. Protein-energy supplementation proved the most efficient.(AU)

Viabilidade econômica de vacas leiteiras F1 Holandês x Zebu com diferentes bases maternas e ordens de parto / Economic viability F1 Holstein x Zebu cows of dairy from different maternal bases and birth orders

Objetivou-se avaliar a viabilidade econômica de vacas F1 de Holandês x Zebu de diferentes bases maternas e ordens de parto. Foram utilizados dados do Campo Experimental da Epamig (Felixlândia-MG). Analisaram-se 406 lactações de vacas F1 H x Z de diferentes bases maternas. Estimaram-se a receita e os custos operacional efetivo, operacional total e custo total. As F1 Holandês x Gir tiveram médias de custos maiores (R$ 3582,30), seguidas pelas F1 Holandês x Nelogir (R$ 3448,06), e o menor foi das F1 Holandês x Nelore (R$ 3145,07). A receita total foi maior para as vacas F1 Holandês x Gir e F1 Holandês x Nelogir, com valores de R$ 4394,96 e R$ 4245,61, respectivamente, e a menor receita foi para F1 Holandês x Nelore, com valor de R$ 3976,12. O lucro foi de R$ 812, 65; R$ 797,54 e R$ 831,04 para as F1 filhas de base materna Gir, Nelogir e Nelore, respectivamente. Todas as bases maternas são viáveis economicamente e podem ser utilizadas no sistema de produção de leite e bezerros para venda. Todas as ordens de parto de Holandês x Zebu estudadas são viáveis economicamente.(AU)

The objective was to evaluate the economic viability of a milk production system of F1 Holstein x Zebu cows of different maternal bases and calving order. Lactations data of F1 Holtein x Zebu cows (n=406) of different maternal bases, from the experimental field of the EPAMIG at Felixlândia county (MG state, Brasil) were analyzed. Revenue, cost/effect of operation, total operating, and total cost have been estimated. F1 cows Holstein x Gir had averages of higher costs R$ 3582.30, followed by F1 cows Holstein x Nelogir R$ 3448.06; and the lowest was from cows F1 Holstein x Nellore with R$ 3145.07. The total revenue was higher for Holstein x Gir and Holstein x Nelogir with recipe values of R$ 4394.96 and R$ 4245.61 respectively, and the lowest value of R$ 3976.12 for Holstein x Nellore. The profits were R$812.65; R$ 797.54 and R$ 831.04 for animals of groups Holstein x Gir, Holstein x Nelogir and Holstein x Nellore respectively. All genetic groups are economically viable and can be used in the production of milk and calves for sale. All calving order of Holstein x Zebu studied are viable economically.(AU)

The impact of edge effect on termite community (Blattodea: Isoptera) in fragments of Brazilian Atlantic Rainforest / O impacto do efeito de borda na comunidade de cupins (Blattodea: Isoptera) em fragmentos de florestas da Mata Atlântica

Abstract Habitat fragmentation is considered to be one of the biggest threats to tropical ecosystem functioning. In this region, termites perform an important ecological role as decomposers and ecosystem engineers. In the present study, we tested whether termite community is negatively affected by edge effects on three fragments of Brazilian Atlantic Rainforest. Termite abundance and vegetation structure were sampled in 10 transects (15 × 2 m), while termite richness, activity, and soil litter biomass were measured in 16 quadrants (5 × 2 m) at forest edge and interior of each fragment. Habitat structure (i.e. number of tree, diameter at breast height and soil litter biomass) did not differ between forest edge and interior of fragments. Termite richness, abundance and activity were not affected by edge effect. However, differences were observed in the β diversity between forest edge and interior as well as in the fragments sampled. The β diversity partitioning indicates that species turnover is the determinant process of termite community composition under edge effect. Our results suggest that conservation strategies should be based on the selection of several distinct sites instead of few rich sites (e.g. nesting).

Resumo A fragmentação do habitat é considerada uma das maiores ameaças para o funcionamento do ecossistema tropical. Nesta região, os cupins desempenham um papel ecológico importante como decompositores e engenheiros do ecossistema. No presente estudo, testamos se comunidades de cupins são negativamente afetadas pelo efeito de borda em três fragmentos de Mata Atlântica. Para isso, foram amostrados a abundância de cupins e a estrutura da vegetação em 10 transectos (15 × 2 m), enquanto a riqueza, abundância de cupins e biomassa da serrapilheira foram amostrados em 16 parcelas (5 × 2 m) na borda e no interior de cada um dos três fragmentos. A estrutura do habitat (número de árvores, diâmetro à altura do peito e biomassa da serrapilheira) não diferiu entre a borda e o interior dos fragmentos. A riqueza, abundância e atividade dos cupins também não foram afetados pelo efeito de borda. No entanto, foram observadas diferenças na diversidade β entre borda e interior dos fragmentos, bem como nos fragmentos amostrados. O particionamento da diversidade β indicou que a substituição de espécies ("turnover") é o processo determinante da composição da comunidade de cupins sob efeito de borda. Nossos resultados sugerem que as estratégias de conservação devem ser baseadas na seleção de locais distintos em vez de poucos locais (via processo de aninhamento - "nesting").

Antibacterial and antiproliferative activities of the fresh leaf essential oil of Psidium guajava L. (Myrtaceae)

Abstract This study evaluated the antibacterial and antiproliferative activities of the essential oil of Psidium guajava leaves (PG-EO), traditionally used in folk medicine. The essential oil was obtained from fresh leaves by hydrodistillation, using a modified Clevenger apparatus. The major PG-EO chemical constituents were identified by GC-MS and GC-FID as being -caryophyllene (16.1%), -humulene (11.9%), aromadendrene oxide (14.7%), -selinene (13.6%), and selin-11-en-4-ol (12.5%). The antibacterial activity of the essential oil of P. guajava leaves was determined in terms of its minimum inhibitory concentrations (MIC) using the broth microdilution method in 96-well microplates. PG-EO had moderate activity against Streptococcus mutans (MIC = 200 µg/mL), S. mitis (MIC = 200 µg/mL), S. sanguinis (MIC = 400 µg/mL), S. sobrinus (MIC = 100 µg/mL), and S. salivarius (MIC = 200 µg/mL). The antiproliferative activity was evaluated against different tumor cell lines: breast adenocarcinoma (MCF-7), human cervical adenocarcinoma (HeLa), and human gliobastoma (M059J). A normal human cell line (GM07492A, lung fibroblasts) was included. The antiproliferative activity was evaluated using the XTT assay and the results were expressed as IC50. The essential oil showed significantly lower IC50 values against MCF-7 and M059J lines than that obtained for the normal line, showing selectivity. Our results suggest that the essential oil of Psidium guajava L. has promising biological activities and can be considered a new source of bioactive compounds.

Resumo Este estudo avaliou as atividades antibacteriana e antiproliferativa do óleo essencial das folhas frescas de Psidium guajava (PG-OE), tradicionalmente utilizadas na medicina popular. O óleo essencial foi obtido por hidrodestilação das folhas frescas, utilizando aparelho do tipo Clevenger. Os principais constituintes químicos de PG-OE identificados por CG-EM e CG-DIC foram: -cariofileno (16,1%), -humuleno (11,9%), óxido de aromadendreno (14,7%), -selineno (13,6%) e selin-11-en-4-ol (12,5%). A atividade antibacteriana do óleo essencial das folhas de P. guajava foi determinada em termo de sua concentração inibitória mínima (CIM) utilizando o método de microdiluição de caldo em microplacas de 96 poços. PG-OE apresentou moderada atividade contra Streptococcus mutans (CIM = 200 g/mL), S. mitis (CIM = 200 g/mL), S. sanguinis (CIM = 400 g/mL), S. sobrinus (CIM = 100 g/mL) e S. salivarius (CIM = 200 g/mL). A atividade antiproliferativa foi avaliada frente a diferentes linhagens de células tumorais como: adenocarcinoma de mama (MCF-7), adenocarcinoma cervical humano (HeLa) e gliobastoma humano (M059J). Foi incluída uma linhagem celular humana normal (GM07492A, fibroblastos pulmonares). A atividade antiproliferativa foi avaliada utilizando o ensaio XTT e os resultados foram expressos como CI50. As linhagens MCF-7 e M059J mostraram valores significativamente mais baixos de CI50 do que os obtidos para a linhagem normal, mostrando seletividade. Nossos resultados sugerem que o óleo essencial das folhas frescas de Psidium guajava L. possui atividades biológicas promissoras e pode ser considerado como uma nova fonte de compostos bioativos.

Chemical composition and biological activities of essential oil from flowers of Psidium guajava (Myrtaceae)

Abstract Xylella fastidiosa is a plant-pathogenic bacterium that lives inside host xylem vessels, where it forms biofilm which is believed to be responsible for disrupting the passage of water and nutrients. Pectobacterium carotovorum is a Gram-negative plant-specific bacterium that causes not only soft rot in various plant hosts, but also blackleg in potato by plant cell wall degradation. Chagas disease, which is caused by Trypanosoma cruzi, has been commonly treated with nifurtimox and benzonidazole, two drugs that cause several side effects. As a result, the use of natural products for treating bacterial and neglected diseases has increased in recent years and plants have become a promising alternative to developing new medicines. Therefore, this study aimed to determine, for the first time, the chemical composition of essential oil from Psidium guajava flowers (PG-EO) and to evaluate its in vitro anti-Xylella fastidiosa, anti-Pectobacterium carotovorum, anti-Trypanosoma cruzi and cytotoxic activities. PG-EO was obtained by hydrodistillation in a Clevenger apparatus while its chemical composition was determined by gas chromatography-flame ionization detection (GC-FID) and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Major compounds identified in PG-EO were -cadinol (37.8%), -caryophyllene (12.2%), nerolidol (9.1%), -selinene (8.8%), -selinene (7.4%) and caryophyllene oxide (7.2%). Results showed that the PG-EO had strong trypanocidal activity against the trypomastigote forms of Trypanosoma cruzi (IC50 = 14.6 g/mL), promising antibacterial activity against X. fastidiosa (MIC = 12.5 g/mL) and P. carotovorum (MIC = 62.5 g/mL), and moderate cytotoxicity against LLCMK2 adherent epithelial cells in the concentration range (CC50 = 250.5 g/mL). In short, the PG-EO can be considered a new source of bioactive compounds for the development of pesticides and trypanocide drugs.

Resumo Xylella fastidiosa é uma bactéria patogênica que vive dentro dos vasos do xilema hospedeiro, onde forma um biofilme responsável por interromper a passagem de água e nutrientes. Pectobacterium carotovorum é uma bactéria Gram-negativa que causa não só podridão macia em várias plantas hospedeiras, mas também canela-preta na batata por degradação da parede celular da planta. A doença de Chagas, causada pelo Trypanosoma cruzi, é comumente tratada com nifurtimox e benzonidazol, duas drogas que causam vários efeitos colaterais. Como resultado, o uso de produtos naturais para o tratamento de doenças bacterianas e negligenciadas aumentou nos últimos anos e as plantas continuam sendo uma alternativa promissora para o desenvolvimento de novos medicamentos. Portanto, este estudo teve como objetivo determinar, pela primeira vez, a composição química do óleo essencial de flores de Psidium guajava (PG-EO) e avaliar suas propriedades anti-Xylella fastidiosa, anti-Pectobacterium carotovorum, anti-Trypanosoma cruzi e citotóxica in vitro. PG-EO foi obtido por hidrodestilação em um aparelho Clevenger, enquanto sua composição química foi determinada por cromatografia em fase gasosa com detecção por ionização por chama (CG-DIC) e por cromatografia em fase gasosa acoplada à espectrometria de massa (CG-EM). Os principais compostos identificados no PG-EO foram -cadinol (37,8%), -cariofileno (12,2%), nerolidol (9,1%), -selineno (8,8%), -selineno (7,4%) e óxido de cariofileno (7,2%). Os resultados mostraram que o PG-EO apresentou forte atividade tripanocida contra as formas tripomastigotas de T. cruzi (CI50 = 14,6 g/mL), promissora atividade antibacteriana contra X. fastidiosa (MIC = 12,5 g/mL) e P. carotovorum (MIC = 62,5 g/mL) e citotoxicidade moderada contra células epiteliais aderentes (LLCMK2) na faixa de concentração (CC50 = 250,5 g/mL). Em suma, o PG-EO pode ser considerado uma nova fonte de compostos bioativos para o desenvolvimento de pesticidas e drogas tripanocidas.

Clinical impact of Achromobacter xylosoxidans colonization/infection in patients with cystic fibrosis

The rate of diagnosis of colonization/infection of the airways with Achromobacter xylosoxidans has increased in cystic fibrosis patients, but its clinical significance is still controversial. This retrospective, case-control study aimed to evaluate the clinical impact of A. xylosoxidans colonization/infection in cystic fibrosis patients. Individuals who were chronically colonized/infected (n=10), intermittently colonized/infected (n=15), and never colonized/infected with A. xylosoxidans (n=18) were retrospectively evaluated during two periods that were 2 years apart. Demographic characteristics, clinical data, lung function, and chronic bacterial co-colonization data were evaluated. Of the total study population, 87% were pediatric patients and 65.1% were female. Individuals chronically colonized/infected with A. xylosoxidans had decreased forced expiratory volume in 1 s (51.7% in the chronic colonization/infection group vs 82.7% in the intermittent colonization/infection group vs 76% in the never colonized/infected group). Compared with the other two groups, the rate of co-colonization with methicillin-resistant Staphylococcus aureus was higher in individuals chronically colonized/infected with A. xylosoxidans (P=0.002). Changes in lung function over 2 years in the three groups were not significant, although a trend toward a greater decrease in lung function was observed in the chronically colonized/infected group. Compared with the other two groups, there was a greater number of annual hospitalizations in patients chronically colonized/infected with A. xylosoxidans (P=0.033). In cystic fibrosis patients, there was an increased frequency of A. xylosoxidans colonization/infection in children, and lung function was reduced in patients who were chronically colonized/infected with A. xylosoxidans. Additionally, there were no differences in clinical outcomes during the 2-year period, except for an increased number of hospitalizations in patients with A. xylosoxidans.

Cirrhosis in rats does not resolve in the long-term after induction by thioacetamide model

Introductions: Hepatic cirrhosis is a final common pathway of all chronic liver diseases, characterized by deposit of fibrillar collagen and liver failure. Materials and Methods: In this experiment, hepatic cirrhosis was induced in 15 female Wistar rats by a 14-week period, with thioacetamide solution in a 200 mg/kg dosage, via intraperitoneal. Animals were submitted to liver biopsy, and euthanized after a 80-day post-induction period. Serum biochemical analysis was performed, in addition to histopathology by H.E., Picrosirius, Alcian Blue and P.A.S. stainings, following analysis of histological activity index and staging of fibrosis. Morphometric analysis of collagen on Picrosirius slides was also performed. Results: Mortality during experimental period was low (13.33%), and after 80-day period, liver function improved, cellular changes did not altered, and deposition of acidic mucopolysaccharides and glycogen were increased. Liver histological activity did not change significantly (7.25 ± 1.30 to 6.41 ± 1.32), but staging of fibrosis was altered (3.91 ± 0.76 to 4.70 ± 1.11). Interlobular collagen showed a significant decrease (5.14 ± 2.00 to 4.00 ± 1.20), while intralobular collagen was increased (0.23 ± 0.06 to 0.36 ± 0.08). Conclusions: These findings characterize thioacetamide as a safe experimental model for induction cirrhosis, which may be used for future therapy studies.(AU)

Estudo das agressões por cães, segundo tipo de interação entre cão e vítima, e das circunstâncias motivadoras dos acidentes, município de São Paulo, 2008 a 2009 / Study of aggression by dogs, according to the kind of interaction between dog and victim and motivating circumstances in the accidents, Municipality of São Paulo, 2008 to 2009

Caracterizaram-se as agressões por cães, o perfil das vítimas e dos agressores e as circunstâncias desses acidentes. Calculou-se a amostra aleatória a partir de 20 mil notificações/ano de agressões por cães e realizaram-se 594 entrevistas telefônicas. A maior frequência de agressões ocorreu no sexo masculino, faixa etária de cinco a 14 anos. Lesões leves representaram 80,4%. As profundas (19,1%) ocorreram por cães de porte médio seguidas pelos de grande porte. A maioria dos cães era macho adulto, porte médio. Dos entrevistados, 52,5% desconheciam a condição reprodutiva; 41,0% dos cães não eram esterilizados e 6,4% eram esterilizados. Cães sem raça definida (SRD) provocaram 48,4% dos acidentes, e 57,6% das agressões ocorreram em locais privados. Em 56,2% das agressões, as vítimas eram moradoras do imóvel ou pessoas conhecidas. Com animais não conhecidos a agressão mais frequente ocorreu na rua, 30,8%, e 67,5% dos donos permaneceram com os animais. As agressões foram resultantes da interação homem-cão e devem ser estudadas para se identificarem os possíveis comportamentos que desencadeiam a agressão pelo animal.

This study aimed to characterize aggression by dogs, the profile of victims, and perpetrators and circumstances of these accidents. Understanding the interaction between victims and aggressive dogs contributes to preventing aggression. The random sample from 20.000 reports / year of attacks by dogs was calculated and 594 telephone interviews were conducted. The highest frequency of assaults occurred in males from 5 to 14 years of age. Non-severe injuries represented 80.4%. Deep lesions (19.1%) were caused by medium and large dogs. Most dogs were medium size adult males. Of the respondents, 52.5% were unaware of the reproductive condition, 41.0% of dogs were not sterilized and 6.4% were sterilized. Dogs without defined race caused 48.4% of accidents and 57.6% of assaults occurred in private places. In 56.2% assault victims were residents of the property or known people. Aggressions from unknown animals were more frequent on the street (30.8%). 67.5% remained with the animals' owners. The attacks were the result of interaction between man and dog and should be studied to identify which human and canine behaviors can trigger accidents, to understand how the interaction occurs in different situations whithin the same household, with acquaintances, on the street, and with unknown animals. Educational approaches detailing risks and prevention methods are essential.

Caracterização demográfica das populações de cães e gatos supervisionados do município de São Paulo / Demographic characterization of supervised dog and cat populations in Sao Paulo city, Brazil

A caracterização das populações canina e felina domiciliadas do município de São Paulo (SP) foi realizada utilizando-se amostragem complexa com seleção aleatória em dois estágios. Em cada distrito administrativo, foram visitados seis setores censitários e 20 domicílios em cada setor sorteado, de setembro de 2006 a setembro de 2009, totalizando 11.272 entrevistas. A razão homem:cão foi de 4,34, e a razão homem:gato de 19,33. A população canina foi estimada em 2.507.401, e a felina em 562.965. A população canina era composta por 52,7% de machos, e a felina por 45,1%. A proporção de fêmeas esterilizadas, 23,4% das cadelas e 46,1% das gatas, é maior que a de machos, 11,4% dos cães e 31,5% dos gatos. A idade média dos cães era de 4,99 anos e a dos gatos de 3,53 anos. A proporção de cães com restrição de acesso à rua, 64,4%, foi maior que a de gatos, 42,5%. A média de animais/domicílio foi estimada em 1,60 para cães e 1,69 para gatos. A guarda destes animais está associada a fatores culturais, assim a caracterização da população de animais é base da estruturação adequada de programas de controle populacional e de zoonoses.

This study aimed to estimate the owned dog and cat populations of São Paulo city using a complex sample with random selection in two stages. In each administrative district, six census sectors and 20 households in each sampled sector were visited from September 2006 to September 2009, totalizing 11,272 interviews. The human:dog ratio was 4.34 and the human:cat ratio was 19.33. The dog population was 2,507,401 and the cat population, 562,965. The dog population was composted of 52.7% males, while among the cat population it was 45.1%. The proportion of sterilized females (23.4% among dogs and 46.1% among cats) was higher than males (11.4% among dogs and 31.5% among cats). The mean age of dogs was 4.99 years, and for cats, 3.53 years. The proportion of restricted (without access to the street) dogs, 64.4%, was higher than restricted cats, 42.5%. The average number of animals/household was 1.60 for dogs and 1.69 for cats. The animal ownership is associated with cultural factors, therefore the characterization of canine and feline population is essential to implement an adequate animal population management program and zoonosis control.

Digestibilidade intestinal in vitro da proteína de coprodutos da indústria do biodiesel / Intestinal protein digestibility of by-products from biodiesel industry

Determinou-se a digestibilidade intestinal (DI) da proteína de vários coprodutos do biodiesel nas formas de farelo e torta. Foram avaliados oito coprodutos: tortas e farelos de pinhão manso, nabo forrageiro, tremoço, algodão. Os coprodutos foram incubados no rúmen por 16 horas, e os resíduos não degradados no rúmen submetidos à digestão enzimática com solução de pepsina e pancreatina para a determinação da DI. Ainda, nos resíduos da incubação ruminal, foram determinadas: degradabilidade da matéria seca (DR), proteína degradável no rúmen (PDR) e proteína não degradável no rúmen (PNDR). A digestibilidade intestinal da proteína para os coprodutos do biodiesel variou de 2,4 a 48,6%. Todos os coprodutos avaliados caracterizaram-se como alimentos de alto teor proteico, sendo considerados de alta PDR, e apresentaram baixa digestibilidade intestinal da proteína. A DI da proteína dos coprodutos do biodiesel na forma de torta foi maior em comparação com a dos farelos. A torta e o farelo de algodão apresentaram os maiores coeficientes de DI.

The objective of this research was to determine intestinal protein digestibility (ID) of some biodiesel by-products in the form of cakes and the meals. Eight by-products were: cakes and meals of physic nut, turnip, lupine, cotton cake, cottonseed meal. The by-products were incubated in the rumen for 16 hours, were the undegradable rumen residues were submitted to enzymatic digestion with pepsin and pancreatin solution for the determination of ID. In the incubation residues the following was also determined: dry matter degradability (RD), rumen degradable protein (RDP) and rumen undegradable protein (RUP). The intestinal protein digestibility of biodiesel by-products ranged from 2.4 to 48.6%. All the by-products evaluated in this study were characterized as high protein sources and were considered high-RDP. The by-products presented low intestinal protein digestibility. The ID protein of biodiesel by-products was higher in the cakes than the meals. The by-products evaluated, the cottonseed cake and meal presented the highest ID coefficients.

Atividade antibacteriana de furanoeliangólidos / Antibacterial activity of furanoeliangolides

As lactonas sesquiterpênicas licnofólido (1) e eremantólido C (2) e alguns derivados: 1 ,2 -epóxieremantólido C (3), 1 β -hidróxi-2,3-diidroeremantólido C (4), 3 - hidróxieremantólido C (5), cloreto de 4,5-diidroeremantólido-5-n-propilamônio (6) e 1 β -hidróxi- 2,3-diidrolicnofólido (7) foram testadas contra as bactérias Enterococus faecalis S48, Bacillus subtilis CECT 397, Staphylococus aureus ATCC 8, Salmonella typhymurium LT2, Escherichia coli U9 e Proteus sp. Os compostos 1, 4, 5 e 7 apresentaram atividade antibacteriana.

Sesquiterpene lactones lychnopholide (1) and eremantholide C (2) and some derivatives: 1 ,2 -epoxyeremantholide C (3), 1 β -hidroxy-2,3-dihydroeremantolide C (4), 3 -hydroxyeremantholide C (5), 5-n- propylamonium- 4,5-dihydroeremantholide C chloride (6) and 1 β -hydroxy-2,3- dihydrolychnopholide (7) were tested against Enterococus faecalis S48, Bacillus subtilis CECT 397, Staphylococus aureus ATCC 8, Salmonella typhymurium LT2, Escherichia coli U9 e Proteus sp. Compounds 1, 4, 5 and 7 showed activity.

A pilot study of topiramate in children with Lennox-Gastaut syndrome

We conducted an open, add-on study with topiramate (TPM) as adjunctive therapy in Lennox-Gastaut syndrome (LGS), to assess the long-term efficacy and safety and to evaluate quality of life (QL) measurements in the chronic use of TPM. We studied 19 patients (11 male; age ranging from 4 to 14 years) with uncontrolled seizures receiving 2-3 anti- epileptic drugs. Patients were followed up to 36 months of treatment. A questionnaire was used to query parents about QL. Seven patients completed the study at 36 months and seizure frequency was reduced = 75 per cent in 4, and < 50 per cent in patients. Two children became seizure free for more than 24 months. Most side effects were CNS related, with the most frequent being somnolence and anorexia. These were generally transient. One patient dropped-out due to powder in the urine. None of the patients required hospitalization. At 36 months, patients' alertness (2/7), interaction with environment (5/7), ability to perform daily activities (5/7), and verbal performance (6/7) improved on TPM. We conclude that TPM may be useful as adjunctive therapy in the treatment of LGS. The efficacy of TPM was maintained in long-term treatment in more than 40 per cent of patients, long term safety was confirmed and QL improve on TPM.